Igh research - un asistent în descifrarea biologiei cancerului de sân

În ciuda faptului că tot mai multe clinici încep să folosească metode de fenotipare genetică a tumorilor, cercetarea IHC rămâne astăzi principalul asistent în decodarea biologiei cancerului de sân, în prezicerea dezvoltării sale ulterioare, un „predictor” al răspunsului tumorii la tratamentul planificat..

În acest articol veți afla: ce este un studiu imunohistochimic (IHC), care este semnificația IHC în cancerul de sân.

Histochimie (secțiuni de colorare în histologie)

Înainte ca patologul (morfologul) să înceapă să examineze la microscop zona țesutului mamar obținută în rezultatul biopsiei, trebuie să-l picteze cu vopsele speciale.

Coloranții histochimici sunt aplicați pe o secțiune subțire de țesut pentru a vedea la microscop ce celule sunt prezente acolo, localizarea lor în raport unul cu celălalt (structura țesutului). Microscopia cu lumină este o tehnică de rutină pentru examinarea secțiunilor de țesut colorat și este utilizată pe scară largă în diagnosticul cancerului de sân. Cele mai frecvent utilizate pentru colorarea secțiunilor de țesut sunt:

• Hematoxilină - colorează nucleul celulei într-o culoare albastru închis;
• Eozina - face citoplasma celulelor roz. Utilizarea lor combinată se numește colorare hematoxilină-eozină..

Ce este imunohistochimia (IHC)

Un patolog este un medic care a studiat mult timp la o universitate de medicină pentru a ști cum să distingă celulele canceroase de celulele normale dintr-o secțiune de țesut colorat folosind un microscop. De obicei, pentru a face un diagnostic (fie că este benign sau malign), este suficient pentru el să examineze o secțiune de țesut colorată cu hematoxilină și eozină la microscop. Dar uneori acest lucru nu este suficient. Într-o astfel de situație, imunohistochimia vine în ajutor, care adaugă o componentă imunologică identificării morfologice a celulelor și țesuturilor..

Tehnica imunohistochimiei (IHC) completează recunoașterea morfologică a celulelor și țesuturilor folosind anticorpi împotriva antigenelor cunoscute, care sunt specifice pentru anumite tipuri de celule sau componente celulare. Localizarea acestor anticorpi poate fi văzută folosind microscopia cu lumină, deoarece anticorpii conțin markeri recunoscători vizual.

Primele metode de analiză imunohistochimică a cancerului de sân au folosit anticorpi cu etichete fluorescente atașate acestora, care au necesitat utilizarea unui microscop fluorescent special pentru a vedea localizarea acestor anticorpi într-o secțiune a țesutului mamar..

În ultimii 30 de ani, a fost posibilă simplificarea semnificativă a tehnicii utilizate în examinarea IHC a glandei mamare, datorită utilizării unor anticorpi mai specifici (anticorpi monoclonali) cu etichete enzimatice. Acest lucru, la rândul său, a făcut posibilă utilizarea microscopiei cu lumină pentru studii imunohistologice ale glandei mamare, care este mult mai ieftină și, prin urmare, cea mai accesibilă. Cu toate acestea, elementele radioactive (peroxidaza, fosfataza alcalină și fluoresceina), care uneori nu pot fi evitate, necesită tehnici speciale și sunt încă utilizate pe scară largă..

Nevoia de a utiliza imunohistochimia pentru cancer mamar, controlul calității sale și interpretarea rezultatelor obținute trebuie controlate de către departamentul patomorfologic. Este important ca interpretarea datelor obținute în timpul studiului IHC să fie utilizată numai în combinație cu analiza morfologică a țesutului mamar obținută ca urmare a colorării acestora cu hematoxilină și eozină..

Astăzi, cercetarea imunohistochimică în cancerul de sân este o metodă de rutină în majoritatea laboratoarelor morfologice (patologice) și este utilizată pentru a clarifica diagnosticul, precum și în scopuri de prognostic, ca indicator predictiv (predictiv) al modului în care se va comporta cancerul de sân în viitor..

Diagnosticul cancerului de sân și IHC

Atunci când un patolog examinează un material de biopsie la microscop, acesta are două sarcini principale de diagnostic: determinarea originii celulelor tumorale, unde au apărut (în conducte, în lobuli sau în alte părți ale sânului) și confirmarea sau excluderea invaziei țesuturilor din apropiere..

Markeri diagnostici IHC utilizați în cancerul de sân

Încă din primele zile de utilizare a IHC în oncologie, a fost efectuată o căutare a tehnologiilor noi și existente pentru utilizarea anticorpilor care ar putea identifica antigenele celulare cu un grad ridicat de specificitate și sensibilitate. Markerii IHC enumerați mai jos sunt în prezent folosiți pe scară largă pentru a clarifica diagnosticul histopatologic al cancerului de sân:

Citokeratine

• CK5, CK10, CK14 și CK17 sunt citokeratine ale stratului bazal al epiteliului, exprimate de celulele mioepiteliale.
• CK5 / 6 sau „citokeratine bazale” ajută la recunoașterea celulelor mamare normale, atât mioepiteliale, cât și laminare (secretoare).
• 34β12: Acest anticorp ajută la recunoașterea citokeratinelor 1, 5, 10 și 14.

Markeri musculari netezi

• H-caldesmon. Poate fi găsit numai în celulele mioepiteliale ale canalelor de lapte, prin urmare are o specificitate ridicată.
• Actină musculară netedă (SMA). Acest anticorp ajută la detectarea actinei în microfilamente - specificitate scăzută, deoarece SMA se găsește în fibroblaste (în țesuturile care se regenerează).
• Miozină cu lanț greu de mușchi neted (SMMHC) - o componentă structurală a miozinei musculare netede în izoforma SM2. Este exprimat de celulele mioepiteliale ale glandei mamare, are o sensibilitate și specificitate ridicate, deoarece SMMHC este prezent doar în celulele mioepiteliale situate în conductele și lobulii glandei mamare, dar este absent în fibroblastele țesutului conjunctiv al glandei.
• Calponin - polipeptidă, 34 kDa, modulează activitatea actomiozinei. Sensibilitate bună, dar prezentă în fibroblastele țesutului conjunctiv mamar.
• Omolog P63-p53 - marker nuclear, foarte sensibil la celulele mioepiteliale.
• CALĂ: endopeptidă care se exprimă în celulele mioepiteliale.
• P-cadherin este o moleculă de adeziune celulară cu sensibilitate ridicată la celulele mioepiteliale ale țesutului mamar normal. Nu reacționează cu fibroblaste.

Alți markeri

• E-cadherin - molecula de adeziune celulară. Folosit pentru a distinge carcinomul ductal în suti (DCIS) de carcinomul lobular. În carcinoamele suti (LCIS) - DCIS este de obicei detectat prin colorarea membranei, spre deosebire de LCIS, care nu.
• Markeri de melanom: S100, Melan-A, HMB45.
• Markeri limfocitari: CD20, LCA, CD15, CD30.
• Markeri endoteliali vasculari: CD31, CD34, factor VIII, d2-40 (podoplanină).
• Markeri de proliferare celulară: Ki67, MIB-1, PPh3.
• Markeri de apoptoză: Bcl-2 și Bax, Bcl-X.

Exemple de utilizare a IHC pentru rezolvarea problemelor apărute în determinarea patologiei sânilor

Există multe situații în care imunohistochimia contribuie la formularea diagnosticului patohistologic final în patologia sânilor:

• Colorarea E-cadherinei a membranei celulare exclude neoplaziile lobulare (ALH) și LCIS. Lipsa colorării membranei celulare vorbește în favoarea tumorilor lobulare.
• Hiperplazia epitelială comună sau atipia epitelială sau DCIS. În hiperplazia benignă, reactivitatea la CK5 / 6 și CK14 poate fi detectată, în timp ce în hiperplazia atipică și DCIS nu este..

Este carcinom microinvaziv sau altceva? Utilizarea markerilor celulelor mioepiteliale este importantă pentru a evalua dacă există sau nu microinvazie a carcinomului (invazie din stratul laminar în stratul mioepitelial al celulelor). Reactivitatea fibroblastelor, ruperea colorării celulare, colorarea celulelor mioepiteliale ale mușchilor netezi vasculari pot cauza dificultăți în interpretarea imaginii observate la microscop. În această situație, se utilizează doi markeri ai celulelor mioepiteliale, de exemplu, p63 și SMMHC, sau ASMA, sau calponina.

Ce markeri IHC sunt utilizați în panourile de diagnostic pentru patologia sânilor

Setul de markeri (panoul de diagnostic), care este utilizat în studiile IHC în cancerul de sân, depinde în mare măsură de echipamentul laboratorului în care se efectuează imunohistochimia și de experiența medicului care o efectuează. Mai jos sunt recomandările pe care panourile IHC ar trebui utilizate pentru patologia sânilor, oferite de una dintre clinici:

• Miozina lanțurilor grele ale mușchilor netezi (SMMHC) sau markerii calponinei sunt sensibili și specifici citoplasmei celulelor mioepiteliale;
• Actina musculară netedă poate fi utilizată, dar interpretarea ar trebui să țină cont de faptul că este prezentă în fibroblaste (inflamație și cicatrice);
• P63 este un marker sensibil și specific pentru nucleele celulelor mioepiteliale, dar colorarea poate fi intermitentă. Aplicarea unui marker pe citoplasma celulelor mioepiteliale, cum ar fi SMMHC sau calponina, ar trebui utilizată pentru a evita probleme în interpretarea imaginii obținute.

Când se încearcă determinarea prezenței sau absenței celulelor mioepiteliale, trebuie utilizate p63 și SMMHC sau calponină.

Rolul imunohistochimiei în determinarea factorilor „prognostici” și „predictivi” în cancerul de sân

Factorii prognostici oferă informații despre posibilul comportament al cancerului de sân în momentul diagnosticului și sunt independenți de terapie. Adică, cu ajutorul lor, se poate judeca cât de repede va progresa cancerul și, în consecință, în funcție de acest lucru, se poate decide ce volum și tratament este preferabil în fiecare situație specifică..

La rândul lor, factorii „predictivi” (predictivi) oferă informații care fac posibilă evaluarea probabilității unui răspuns tumoral la o anumită terapie. În ciuda faptului că factorii de prognostic și predictivi pot fi sistematizați separat, în diagnosticul și clasificarea cancerului de sân sunt mai des atât prognostici, cât și predictivi.

De exemplu, prezența unei expresii ridicate a HER2. Dacă cancerul de sân her2 este pozitiv (există o cantitate mare de proteină HER2 în tumoră), atunci se procedează agresiv, cu metastaze timpurii către organe îndepărtate. Și dacă tumoarea conține o cantitate mică din această proteină (cancerul de sân her2 este negativ), nu va răspunde la utilizarea medicamentului țintit Herceptin.

Markeri IHC „bazali”

Există o subdiviziune cancer mamar în funcție de ce gene exprimă celulele sale (profilul de expresie genică). Tumorile cu profil caracteristic celulelor bazale sau mioepiteliale ale sânului normal vor arăta prezența markerilor „bazali”. Astfel de tumori au un prognostic slab. Majoritatea acestor tumori „bazale” sunt complet absente din ER, PR (receptori de estrogen și progesteron) și proteina HER2. Adesea fac metastaze la creier, plămâni.

Până în prezent, nu există un consens cu privire la un profil imunohistochimic (care markeri IHC ar trebui utilizați) care ar defini în mod clar aceste tipuri de cancer „bazal”. Aceste tumori cu prognostic slab includ așa-numitul „cancer mamar triplu negativ”, care nu are ER, PR și HER2, dar exprimă citokeratine bazale 5/6 și 14, receptorul factorului de creștere epidermică (EGFR) și C-KIT. De asemenea, pot exprima P-cadherină și adesea p63.

Există similitudini între cancerul de sân „bazal” și cancerele care apar la femeile cu mutație BRCA1.

EGFR este adesea exprimat în forme de cancer „bazale”, astfel încât pacienții cu astfel de tumori pot beneficia de tratamentul cu inhibitori EGFR.

Markeri IHC de proliferare (rata de creștere a tumorii)

Numărul de mitoze sau procentul de celule din mitoză a fost mult timp considerat un „biomarker” morfologic pentru prognosticul cancerului. Există un număr de markeri IHC care demonstrează activitatea proliferativă a celulelor (numărul de mitoze):

• Ki67 este un antigen care este exprimat în nucleul celulelor în toate etapele ciclului celular și este un marker util al proliferării celulare;
• MIB1 este un anticorp care reacționează cu Ki-67 în țesutul fixat în formalină sau parafină;
• PPh3.

Markeri IHC ai apoptozei

Apoptoza sau „sinuciderea celulară programată” este un biomarker pentru tumorile agresive. Proteinele apoptozei pot fi identificate folosind IHC:

• Bcl-2;
• Wah;
• Bcl-X.

Alți markeri „predictivi”

• p53. Mutațiile genei supresoare tumorale p53 (TP53) sunt detectate la 20-30% din cancerele de sân. Aceste mutații genetice sunt mai frecvente la femeile cu sindroame ereditare de cancer de sân decât la femeile cu cancer sporadic. Pentru un pacient cu predispoziție genetică la cancerul de sân, se poate recomanda testarea p53. Detectarea mutațiilor în p53 este, de asemenea, considerată ca un posibil predictor al răspunsului cancerului de sân la chimioterapie, dar detectarea imunohistochimic a proteinei p53 într-o tumoare nu reflectă starea mutației p53..
• Topoisomeraza II alfa. Aceasta este ținta antraciclinei, un medicament chimioterapic utilizat adesea în tratamentul cancerului de sân.