Imunohistochimie (igh-analysis) a sânului

Uneori rezultatele histologiei sunt insuficiente. Dacă nu este posibil să se obțină un răspuns final și să se facă un diagnostic sau este necesar să se clarifice parametrii moleculari ai formării tumorii, este prescris un studiu imunohistochimic.

Ce este

Metoda imunohistochimiei este utilizată ca metodă suplimentară. Ajută la identificarea proteinelor specifice din materialul biologic care sunt caracteristice unui anumit tip de celulă și, ca rezultat, distinge un tip de formare tumorală de altul. De asemenea, studiul ajută la identificarea:

1. Markeri imunohistochimici care sunt responsabili pentru sensibilitatea tumorii la efectele medicamentelor, radioterapie.
2. Natura metastatică a originii formării și determină sursa primară a leziunii.
3. Hormoni și receptori pentru ei.
4. Malignitate celulară.

IHC ca metodă de diagnostic este utilizat pe scară largă în oncologie. Acest tip de studiu de țesut implică utilizarea anumitor reactivi. Acestea conțin anticorpi sau compuși proteici care sunt etichetați cu anumite substanțe.

IMPORTANT! Anticorpii (imunoglobuline, proteine ​​specifice) sunt produși de diferite celule ale corpului și oferă imunitate la introducerea antigenului. Adesea produs de viruși, bacterii, oncologie, vaccinare, transplant de țesut și uneori împotriva propriilor celule, ceea ce duce la patologii autoimune. Ia-le de la diferite animale.

La contactul cu antigenii care pot fi conținuți în biopsia studiată, apare o reacție specifică (antigenele sunt substanțe intercelulare ale țesuturilor, componente ale structurilor celulare). Ca rezultat, se poate judeca despre prezența sau absența acestei sau acelei substanțe în țesuturi..

IMPORTANT! Antigenii sunt un corp străin genetic care, atunci când este ingerat, provoacă un răspuns imun, și anume producerea de anticorpi pentru a suprima acest agent străin. În cazul analizei IHC, antigenele sunt molecule care sunt produse de celule tumorale modificate patologic.

Specificitatea structurală a studiului - distinge fundamental IHC de alte metode de diagnostic imunologic care utilizează reacția antigen-anticorp. Adică, experții evaluează, pe lângă prezența anumitor substanțe în țesuturi (cu sau fără colorare) și compoziția cantitativă a acestora (în funcție de intensitatea colorării), și distribuția spațială a diferitelor elemente structurale (citoplasmă, nucleu, membrană celulară etc.) într-un strat subțire. tăiat pătat.

Metode de cercetare

Reacția poate fi obținută în mai multe moduri. Direct este adesea folosit, în care este utilizat un tip de anticorp marcat. Acesta din urmă trebuie să se lege de o substanță detectabilă sau de o moleculă țintă. Dacă acesta din urmă este prezent în specimenul de biopsie, atunci țesutul examinat este colorat.

Metoda indirectă este considerată mai informativă și mai sensibilă. Esența sa constă în introducerea etapizată a 2 anticorpi diferiți. Anticorpii primari nemarcați reacționează cu antigenul tumoral din specimenul de biopsie și formează un complex anticorp-antigen. Apoi, sunt injectați anticorpi (reactivi) secundari deja marcați, care se leagă de o parte specifică a moleculei de anticorp primar. Adică, anticorpii primari sunt antigeni pentru secundari.

Când este programat studiul?

IHC este prescris atunci când examenul histologic obișnuit este insuficient. De exemplu, atunci când o tumoare de sân are o structură microscopică nespecifică, ceea ce nu permite un diagnostic final precis.

Ce arată

Biopsia cu imunohistochimie este o parte importantă a verificării diagnosticului pentru cancerul de sân, prostată, țesuturi moi etc. Este deosebit de important să se studieze limfoamele, deoarece este adesea imposibil să se diagnosticheze această boală fără IHC. Studiul IHC joacă un rol important în determinarea tipului histologic al formațiunilor tumorale nediferențiate, precum și a metastazelor care au un focus primar inexplicabil.

Imunohistochimia cancerului de sân este utilă în prezicerea evoluției procesului tumoral și a posibilității unei terapii țintite. Ajută la evaluarea:

• starea funcțională a celulelor de educație;
• potențialul malign și rata de creștere a tumorii;
• tendinta la metastaze.

Cum se face analiza?

Pentru a efectua un studiu, sunt necesare probe ale tumorii în sine și ale țesuturilor din apropiere. Se pot obține cu biopsie sau după operație. Materialul trebuie să treacă prin mai multe etape de pregătire înainte de studiu: fixare, clătire, deshidratare, imersiune în parafină sau încorporare cu o altă substanță.

Obiectul biologic investigat ar trebui să se dovedească dens, dar nu fragil. În primul rând, materialul este spălat, deshidratat și compactat în alcooli cu rezistență crescândă. Apoi este clarificat prin imersiune într-un amestec de alcool absolut și O-xilen într-un raport 1: 1. După aceea, este plasat în mai multe porțiuni de O-xilen pur. Și numai atunci obiectul biologic este îmbibat în parafină. Ultima etapă ajută la conservarea țesutului și la păstrarea caracteristicilor sale structurale în blocul de parafină pentru o lungă perioadă de timp..

Apoi, asistentul de laborator realizează felii din aceste blocuri folosind un dispozitiv special - un microtom, cu o grosime de până la 1 micron. Secțiunile obținute sunt lipite pe o lamă de sticlă, care este untă cu glicerină și un amestec de proteine. Uscat.

Pentru ca materialul de testat să reacționeze cu anticorpul, este necesar să-l degresăm și să îndepărtăm parafina. Procedura se numește depilare. Pentru implementarea sa, se utilizează 3 porții de O-xilen, precum și alcooli cu rezistență descendentă.

Ultimul pas este colorarea. Se efectuează pentru a vedea în mod clar structura țesuturilor la microscop. Tehnicienii de laborator pot folosi o mare varietate de coloranți. Ele pot fi clasificate condiționat după:

• origine, de exemplu, animale - carmin, vegetal - hematoxilină, sintetică - eozină;
• proprietăți chimice, de exemplu neutre, bazice, acide.

Cel mai adesea, pentru această procedură se utilizează eozină, hematoxilină. Materialul biologic este plasat într-o soluție de hematoxilină timp de câteva minute, apoi spălat și rezultatele colorării sunt diferențiate. După aceea, se asigură colorarea în eozină, spălarea și deshidratarea în alcooli cu putere crescătoare. Colorarea secvențială în mai multe etape face posibilă determinarea tot mai mare a nosologiei și fenotipului formării tumorii în fiecare etapă. Patologul examinează materialul la microscop după fiecare colorare. Și numai după evaluarea modificărilor și interpretarea informațiilor primite, el prescrie un grup de anticorpi.

Pentru a obține date exacte despre procesul patologic și pentru a verifica boala, asistentul de laborator procedează la prelucrarea probei preparate cu reactivi speciali care conțin anticorpi marcați. Rezultatul este o reacție între anticorp și antigen. Aceasta este însoțită de o vizualizare caracteristică care depinde de substanțele utilizate pentru etichetare.

Ce înseamnă rezultatele?

Imunohistochimia glandei mamare este o analiză complexă în mai multe etape, al cărei rezultat este influențat de mulți factori, de exemplu, calitatea slabă a reactivilor, fixarea insuficientă a obiectului biologic în studiu sau un grup de anticorpi selectat incorect. Numărul de celule țintă căutat este de sute, așa că specialistul trebuie să înțeleagă ce caută și să utilizeze anticorpii necesari pentru aceasta..

Histologii evaluează intensitatea colorării celulelor tumorale după interacțiunea cu reactivii conform unei scări speciale:

• 0-1 + - fără oncologie;
• 2+ - educație oncologică negativă;
• 3+ - educație oncologică pozitivă.

Durata IHC în cancerul de sân depinde în mare măsură de metoda de administrare a acestuia. Este manual și automat. Acesta din urmă este considerat mai perfect, deoarece probabilitatea unei erori tehnice este redusă la minimum și se efectuează mult mai rapid..

Înainte de a stabili tactica tratamentului, oncologul pune diverse întrebări: care este probabilitatea unei recidive a bolii la un pacient sau a morții acestuia, ce rezultat al tratamentului poate fi așteptat. Pentru a face acest lucru, un specialist studiază caracteristicile și caracteristicile tumorii și, în funcție de diferiți factori predictivi și prognostici, prescrie tactici de tratament.

Factori prognostici

Acești factori includ semnele fundamentale care determină caracteristicile evoluției bolii și rezultatul acesteia. Pentru formele operabile de cancer mamar, acești factori includ: structura morfologică neoplasme și dimensiunea acestuia, starea ganglionilor limfatici. Adică, astfel de caracteristici determină cronologia bolii.

Caracteristicile factorilor de prognostic:

1. Pe baza caracteristicilor biologice ale formării tumorii.
2. Corelat cu speranța de viață a pacientului, indiferent de tactica terapiei.
3. Împărțiți pacienții în funcție de gradul de risc de deces, recidivă.
4. Exemple: indicele activității mitotice, enzimele proteolitice, antiogeneza etc..

Indicele de activitate mitotică (IMA) este un factor de prognostic independent care caracterizează speranța de viață a pacienților. La pacienții cu un indice mai mic de 10 în timpul urmăririi, rezultatul letal a fost de 6%, la pacienții cu un indice mai mare de 10 - 28%.

Enzimele proteolitice sunt importante în procesul de metastază. În celulele maligne transformate, se produc mai multe astfel de enzime decât în ​​cele sănătoase, prin urmare, în formațiunile maligne, se observă eliberarea acestor substanțe în spațiul intercelular și o creștere a activității. Adică, enzimele sunt implicate în procesul de oncogeneză. T. despre. pacienții cu niveluri scăzute ale acestor enzime au un prognostic mai bun pentru supraviețuirea fără boală.

Capacitatea unei neoplasme de a crește și de a metastaza depinde în mare măsură de angiogeneză - formarea de noi vase de sânge. În timpul observării pacienților timp de 10 ani, sa constatat că la femeile cu o valoare ridicată a densității de microvase din tumoră, prognosticul este mai rău..

Factori predictivi

Acești factori prezic eficacitatea tratamentului. Acestea ajută la identificarea unui grup de pacienți cu un răspuns mai mult sau mai puțin semnificativ la terapie. De exemplu, pentru a determina eficacitatea medicamentelor hormonale, nivelul receptorilor hormonilor steroizi.

Factorii clinici care ajută la interpretarea răspunsului la terapie în cancerul metastatic includ:

1. Localizare și indicator cantitativ al metastazelor. De exemplu, cu leziuni osoase - prognosticul este relativ favorabil - leziuni osoase, 2 organe, plămâni - mai puțin favorabile - cu leziuni la mai mult de 2 organe, prezența metastazelor în ficat, creier etc. - nefavorabilă.
2. Intervalul de timp dintre tratamentul neoplasmului primar și apariția metastazelor. Cu cât este mai lung, cu atât prognosticul este mai favorabil..
3. Starea generală de sănătate a pacientului.
4. Categoria de vârstă. Femeile aflate în postmenopauză sunt mai predispuse să răspundă favorabil la terapie.
5. Receptorii hormonilor steroizi din tumoare (neoplasmele hormon-independente nu răspund la tratamentul hormonal).

Cancerul de sân metastatic este considerat o afecțiune cronică. După regresia completă rezultată din chimioterapie, speranța de viață de 5-10 ani este destul de rară, în aproximativ 5-20% din cazuri. Prin urmare, pentru tratament, este considerată cea mai bună opțiune - utilizarea secvențială a efectelor terapeutice cu cea mai mică toxicitate posibilă pentru a obține efectul paliativ maxim și a întârzia progresia patologiei, moartea.

Fiabilitatea rezultatelor IHC la nivelul sânilor ajunge la 99%. Tehnica este sensibilă și foarte specifică. Ajută la verificarea procesului patologic și la stabilirea stadiului bolii. Pentru punerea sa în aplicare, este necesar un minim de material pentru biopsie și reactivi, în timp ce va fi informativ chiar și după mult timp după efectuarea unei biopsii.